PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
[Tyr34]-甲狀旁腺激素(7-34) 酰 (牛)酰酸叔丁酯

[Trp4]-Kemptide(S)-1-N-Boc-2-甲基哌

[Tyr8]緩激肽BOC-N-甲基-L-氨酸

[Tyr9]- β-促黑激素 (豬)氫化鋰

α-心鈉素(1-28), human鄰磺酰

α-促黑激素硫代草氨酸酯

β-淀粉樣蛋白(1-42),人(R)-1-N-Boc-2-甲基哌

β-淀粉樣蛋白(25-35)3,6-二吡啶羧酸

β-促黑激素，人D-二甲酰

β-促黑激素，猴氟-

Ac-垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38，人，小鼠，綿羊，豬，大鼠2,5-二

Ac-YVAD-肽核酸特戊?；狨?/span>

促腎上腺皮質(zhì)激素（1-10），人間甲酰

促腎上腺皮質(zhì)激素（1-13），人間氟甲酰

促腎上腺皮質(zhì)激素（1-16），人氧基-1,1,1-三氟--2-酮

促腎上腺皮質(zhì)激素（1-17），人N-芐基甘氨酸

促腎上腺皮質(zhì)激素(1-24), 人對環(huán)己酮甲酸酯

促腎上腺皮質(zhì)激素（1-39），人氫氧化鋇
單純皰疹病毒1型探針法熒光PCR檢測試劑盒β-抑制蛋白2抗體/β休止蛋白2/β-arrestin抗體Phospho-FoxO3a (Ser294) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、叉頭蛋白3A抗體IgG100 ul

炭疽桿菌抗體Phospho-FoxO3a (Ser253) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、叉頭蛋白3A抗體IgG100 ul

腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白抗體FOXO4/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、叉頭蛋白4抗體IgG100 ul

血管緊張素Ⅱ1A型受體抗體Phospho-FoxO4 (Ser193) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、叉頭蛋白4抗體IgG100 ul

ABI1/SSH3BP1蛋白抗體phospho-FOXO4 (phospho S197) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、叉頭蛋白4抗體IgG100 ul

?；M蛋白H1b抗體phospho-FOXO4 (Ser262) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、叉頭蛋白4抗體IgG500 ul

酸化雄激素受體抗體FOXF1/FITC  熒光素標(biāo)記叉頭蛋白F1抗體IgG100 ul

多功能DNA修復(fù)酶抗體FOXM1/HFH 11/FITC  熒光素標(biāo)記插頭蛋白M1抗體IgG20 ul

AP2關(guān)聯(lián)激酶1抗體FoxP1/FITC  熒光素標(biāo)記FoxP1（T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子）抗體IgG100 ul