產(chǎn)品名稱：總生物堿含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

規(guī)格：48樣、96樣、

貨號(hào)：GOY-016365

檢測(cè)方法：可見(jiàn)分光光度法、微板法

產(chǎn)品分類：氧化應(yīng)激系列

公司產(chǎn)品僅用于科研貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質(zhì)期：6個(gè)月

【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】

配液1、將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照1:1稀釋(1 份濃縮復(fù)

溶液+1份去離子水)用于樣本的復(fù)溶。

配液2、將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19

稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按 所需用量

配制洗滌液。

配液3、將30X濃縮樣品提取液用去離子水按照1:29稀釋(1份

濃縮洗滌液+29份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

【所用儀器、試劑】

儀        器:微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b

置、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g )

微量移液器:單道 20μl~200μl、100μl~1000μl、多道 250μl

試            劑:乙腈、中性氧化鋁

測(cè)定步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測(cè)定樣本較少，可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、 樣本測(cè)定（在96孔板中依次加入下列試劑）

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。

phospho-JAK2(Tyr221)  化酪氨激JAK-2抗體紅生成受體(EPOR)ELISA試劑盒

Jak3  酪氨激JAK-3抗體紅生成(EPO)ELISA試劑盒

Phospho-Jak3 (Tyr785)  化酪氨激JAK-3抗體紅膜(EMP)ELISA試劑盒

Phospho-Jak3 (Tyr980/981)  化酪氨激JAK-3抗體紅激因子(ESF)ELISA試劑盒

JNK1/3  氨基末端激1/3抗體橫紋肌輔肌動(dòng)α(sm Actinin-α)ELISA試劑盒

JNK2  氨基末端激2抗體亨廷頓相關(guān)1(HAP1)ELISA試劑盒

JNK3/MAPK10  氨基末端激3抗體黑瘤衍生亮氨拉鏈額外核因子(MLZE)ELISA試劑盒

Jab1  Jun激活區(qū)域-連接1抗體黑色抗體(MC Ab)ELISA試劑盒

phospho-JNK1/2/3(Thr183/185)  化氨基末端激1/2/3抗體黑色激(MSH)ELISA試劑盒

JNK1/2/3  氨基末端激1/2/3抗體黑色濃縮激(MCH)ELISA試劑盒

JAM1/CD321  連接粘附分子1黑色瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)ELISA試劑盒

p300/KAT3B  轉(zhuǎn)錄接頭EP300抗體黑色瘤相關(guān)抗原D4(MAGED4/MAGED4B)ELISA試劑盒

KCNA5  電壓閥門(mén)通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體黑色瘤活性抑制(MIA)ELISA試劑盒

KCNG4/KV6.3  離子通道G4抗體黑色瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒

KCNA7  電壓閥門(mén)通道混合器相關(guān)亞家族成員7抗體核轉(zhuǎn)錄因子κBp65(NFκBp65)ELISA試劑盒細(xì)胞CASPASE-7表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒10/50 次人主動(dòng)脈內(nèi)皮微小RNA大鼠巨噬炎性3α（MIP-3α/20）ELISA試劑盒,

細(xì)胞CASPASE-7表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒10/50 次人主動(dòng)脈平滑肌微小RNA兔子可溶性CD40配體（sCD40L）ELISA試劑盒,

CASPASE-7表達(dá)西方雜交分析試劑盒5次人心肌微小RNA抑制β-B（Inhbb）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

CASPASE-7免疫共沉淀分析試劑盒5次人心肌-成人微小RNA哥倫比亞CNA瓊脂礎(chǔ)

CASPASE-7表達(dá)elisa試劑盒25次人心肝成纖維微小RNADL-2-氨丁

細(xì)胞CASPASE-8表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒10/20次人心臟成纖維-成人心室微小RNACBZ-L-天冬

冰凍切片組織TRAIL 表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次人心肌成纖維-成人心房微小RNANHS活化瓊脂糖凝膠4FF

石蠟切片組織TRAIL 表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次人角膜上皮微小RNA人c-jun ELISA試劑盒,

載玻片細(xì)胞TRAIL 表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次人角膜微小RNA人質(zhì)金屬抑制因子2（TIMP-2）ELISA試劑盒,TIMP-2 ELISA kit

冰凍切片組織TRAIL 表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次人視網(wǎng)膜色上皮微小RNA人透明質(zhì)結(jié)合（HABP）ELISA試劑盒,HABP ELISA kit

石蠟切片組織TRAIL 表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次人晶狀體上皮微小RNA人登革熱抗體（DF-Ab）ELISA試劑盒,DF-Ab ELISA

細(xì)胞TRAIL 表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒10/50 次人虹膜色上皮微小RNA人鈣調(diào)（CAM）ELISA試劑盒, CAM ELISA

細(xì)胞TRAIL 表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒10/50 次人結(jié)膜成纖維微小RNA人前列F（PGF）ELISA試劑盒,PGF ELISA

TRAIL 表達(dá)西方雜交分析試劑盒5次人無(wú)色睫狀上皮微小RNA人前列特異性抗原（PSA）ELISA試劑盒,PSA ELISA

TRAIL 免疫共沉淀分析試劑盒5次人小梁網(wǎng)微小RNA人環(huán)加氧2（COX-2）ELISA試劑盒,
總生物堿含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)試劑盒ADP核糖基化因子結(jié)合2抗體

可溶程序性死亡分子-1檢測(cè)試劑盒精氨加壓受體2抗體

可溶性鳥(niǎo)環(huán)化檢測(cè)試劑盒凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣ASC抗體

可溶性CD163分子檢測(cè)試劑盒絲狀肌動(dòng)結(jié)合抗體

可溶性CD36檢測(cè)試劑盒抗凝血3抗體

可溶性CD38檢測(cè)試劑盒人血清白單克隆抗體

可溶性CD40配體檢測(cè)試劑盒載脂A4抗體

可溶性CD44V6檢測(cè)試劑盒化Rho鳥(niǎo)交換因子2抗體

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。