PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn)，即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線(xiàn) (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩?lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線(xiàn)檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線(xiàn)性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線(xiàn)性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
雷酚內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Cas9 (<i>S. pyogenes</i>) (D8Y4K) Rabbit mAb (PE Conjuga)氨基咪唑

雷公藤紅素(標(biāo)準(zhǔn)品)BRSK2 (D29B6) Rabbit mAb2-氯-甲

雷公藤甲素(標(biāo)準(zhǔn)品)Synaptophysin (D35E4) Rabbit mAb2-C-甲基-D-核糖酸-1,內(nèi)酯

雷公藤內(nèi)酯酮（標(biāo)準(zhǔn)品）Synaptophysin (D35E4) Rabbit mAb2-基酸

類(lèi)葉升麻苷,毛蕊花糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Bafilomycin A12-基酸

利卡靈-B(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb (Biotinylad)2-溴-4,6-二甲基吡啶

利血平(標(biāo)準(zhǔn)品)Androgen Receptor Antibody (Carboxy-rminal Antigen)1H-1,2,三氮唑-羧酸

櫟櫻酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) (HRP Conjuga)羥基-2-酸

連翹苷(標(biāo)準(zhǔn)品)TIM-3 (D5D5R™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)L-焦谷氨酸甲酯

連翹酯苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)RagC (D31G9) XP® Rabbit mAb吖啶橙

連翹酯苷B（標(biāo)準(zhǔn)品）RagC (D31G9) XP® Rabbit mAb酰乙酸乙酯

蓮心（標(biāo)準(zhǔn)品）Synaptophysin (D40C4) Rabbit mAb(三氟甲氧基)基乙

三尖杉(標(biāo)準(zhǔn)品)BSP II Antibody非諾貝特

遼東楤木皂苷Ⅹ（標(biāo)準(zhǔn)品）TTK (D15B7) Rabbit mAb基磺酰氯

硫酸氨基葡萄糖（標(biāo)準(zhǔn)品）Anti-mouse IgG (H+L) (DyLight™ 680 Conjuga)6-氯煙酸乙酯

硫酸黃連（標(biāo)準(zhǔn)品）Anti-mouse IgG (H+L) (DyLight™ 680 Conjuga)2-氯煙酰氯

硫酸軟骨素(標(biāo)準(zhǔn)品)Livin (D61D1) XP® Rabbit mAb茚滿(mǎn)

龍膽苦苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Livin (D61D1) XP® Rabbit mAb并呋喃-2-羧酸
梨孢鐮刀菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒酸化蛋白激酶AKT1抗體CD151/MER2/PETA-3/FITC  熒光素標(biāo)記CD151抗體IgG100 ul

ASH1L蛋白抗體CD155/PVR/FITC  熒光素標(biāo)記CD155抗體IgG20 ul

α2C-AR腎上腺素能受體抗體CD160/By55/FITC  熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞受體BY55抗體IgG100 ul

中心體蛋白AZI1抗體CD161/NK1.1/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、CD161抗體IgG100 ul

α蛋白激酶3抗體（心肌）CD163/M130/FITC  熒光素標(biāo)記CD163抗體IgG20 ul

表皮型脂氧合酶3抗體（魚(yú)鱗病相關(guān)蛋白）CD166/ALCAM/FITC  熒光素標(biāo)記活化白細(xì)胞粘附分子抗體IgG100 ul

錨蛋白重復(fù)域28抗體CD167a/DDR1/FITC  熒光素標(biāo)記CD167a抗體IgG20 ul

淋巴細(xì)胞相關(guān)AF4樣蛋白抗體CD169/Siglec-1/sialoadhesin /FITC  熒光素標(biāo)記CD169抗體IgG100 ul

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體CD170/Siglec-5/FITC  熒光素標(biāo)記唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素5抗體IgG20 ul