客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
自身免疫調(diào)節(jié)因子(AIRE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　假單胞菌　5ml

心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　黃硬皮馬勃　1g

絨毛膜促性腺激素α肽(CGα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　粉紅單端孢霉　250mg

刺猬因子相互作用蛋白(HHIP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　光帽傘　1g

糖基化脂酰肌醇特異性脂酶D1(GPLD1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　枯草芽孢桿菌　5g

免疫球蛋白A1(IgA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　Polyangium fumosum 　1g

免疫球蛋白A2(IgA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　冷解糖芽孢桿菌　25g

D-氨基酸氧化酶激活因子(DAOA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　普氏菌　5g

無翅型MMTV整合位點家族成員5A(WNT5A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　多主葡萄殼菌　25g

Discs大同源物4(DLG4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　釀酒酵母　5g

神經(jīng)調(diào)節(jié)素4(NRG4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　少根根霉　1g

鳥氨酸氨基甲酰轉移酶(OCT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　杰丁畢赤酵母　5g

神經(jīng)調(diào)節(jié)素3(NRG3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　1.0 M 二溶液　球孢白僵菌　100ml

無翅型MMTV整合位點家族成員5A(WNT5A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　1.0 M 二溶液　污膠鼓菌　25ml

Ⅰ型膠原α1(COL1α1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　1.0 M 二溶液　白色沉積物桿菌　500ml

甘露糖受體C1(MRC1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　根瘤菌　5g

甘露糖受體C1(MRC1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　拜氏醋桿狀菌　25g

胰島素樣蛋白3(INSL3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　貝倫格葡萄座腔菌梨生?；汀?g
桔青霉探針法熒光PCR檢測試劑盒細胞色素C氧化酶亞基3抗體Rabbit chicken IgM Whole serum  兔抗雞IgM抗血清300 ul

細胞色素C氧化酶亞基6B抗體Rabbit dog IgG Whole serum  兔抗狗IgG抗血清300 ul

酸化致癌基因C-Myc抗體Rabbit FITC Whole serum  兔抗熒光素抗血清300 ul

酸化致癌基因C-Myc抗體Rabbit Goat IgG Whole serum  兔抗羊IgG抗血清300 ul

細胞色素P450 11B1抗體Rabbit Goat IgM Whole serum  兔抗羊IgM抗血清300 ul

環(huán)酸鳥苷抗體Rabbit Guinea IgG Whole serum  兔抗豚鼠IgG抗血清300 ul

內(nèi)皮因子維生素B12受體抗體Rabbit Guinea IgM Whole serum  兔抗豚鼠IgM抗血清100 ul

原癌基因cMAF抗體Rabbit horse IgG Whole serum  兔抗馬IgG抗血清300 ul

18號染色體開放閱讀框56抗體Rabbit HRP Whole serum  兔抗HRP抗血清100 ul
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。