熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 球孢子菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Coccidioidesspp. | 貨號 | YSP96573 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
喹硫(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%)TCF3/TCF7L1 (D15G11) Rabbit mAb利多卡因 二氯喹啉酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%)TCF3/TCF7L1 (D15G11) Rabbit mAb硝酸鐿 基三氯化錫(標(biāo)準(zhǔn)品)IRF-9 (D9I5H) Rabbit mAb (Mouse Specific)纈沙坦烴化物 標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)ERC1 (P85) Antibody6,7-二甲氧基喹唑啉-酮 標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)ERC1α (D1055) Antibody2,5-二氯-溴吡啶 間三酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)ERp44 Antibody溴-甲基吡唑 威標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%)ERp57 (A484) Antibody三水氯化釕 吡嘧磺隆(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1316) Antibody氯鈀酸鈉 草(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5%)Notch3 Antibody硅烷偶聯(lián)劑 KH-540 草標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)Oct-4A (C52G3) Rabbit mAb氧基芐 殘殺威標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%)M-CSF Receptor (E4T8Z) Rabbit mAb對磺酰甲酸 毒莠定(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%)Calreticulin Antibody水楊甙 嘧霉(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%)VEGF Receptor 1 Antibody2-氨基-基-5-甲基噻吩 甜菜寧(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)FGF Receptor 4 Antibody氧代-1,二氫-2,6-吡啶二甲酸 甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)CHOP (L63F7) Mouse mAb1-乙酰哌 氯草定(標(biāo)準(zhǔn)品)CHOP (L63F7) Mouse mAb十二烷基二甲基芐基氯化銨 溴(標(biāo)準(zhǔn)品)p18 INK4C (DCS118) Mouse mAb2,二氟笨磺酰氯 吡(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%)p18 INK4C (DCS118) Mouse mAb1-萘酸
球孢子菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒牛細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA試劑盒P311 proin 神經(jīng)再生相關(guān)蛋白抗體100 ul 牛維生素D(VD)ELISA試劑盒p38MAPK/MAPK14 絲裂原活化蛋白激酶p38抗體100 ul 牛維生素C(VC)ELISA試劑盒phospho-p38(Thr180/Tyr182) 酸化-絲裂原活化蛋白激酶p38抗體100 ul 牛維生素B12(VB12)ELISA試劑盒phospho-p38 MAPK/MAPK14 (Thr180/Tyr182) 酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗體100 ul 牛維生素A(VA)ELISA試劑盒MKK3 絲裂原活化蛋白激酶MKK3抗體100 ul 牛唾液酸(SA)ELISA試劑盒Phospho-MKK3 (Ser189)/MKK6 (Ser207) 酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗體1 Kit 牛褪黑素(MT)ELISA試劑盒SEK1/MKK4 絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體100 ul 牛銅鋅-過氧化物岐化酶(Cu/Zn-SOD)ELISA試劑盒Phospho-SEK1/MKK4 (Ser80) 酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體100 ul 牛銅藍(lán)蛋白(CP)ELISA試劑盒Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) 酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體100 ul |
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