判斷GLUT1 ELISA試劑盒靈敏度是否足夠,關(guān)鍵在于驗(yàn)證它能否在你的樣本基質(zhì)中可靠檢測(cè)到目標(biāo)濃度。小編你梳理一下核心驗(yàn)證方法和關(guān)鍵考量點(diǎn)。
一、核心驗(yàn)證方法
標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證(評(píng)估理論靈敏度)
操作:用試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品,配制LOD/LOQ附近的低濃度梯度(如0.1、0.2、0.5 ng/mL),每個(gè)濃度做3個(gè)復(fù)孔。
合格標(biāo)準(zhǔn):信號(hào)與空白孔比值(S/N)≥ 3,且變異系數(shù)(CV)≤ 20%。
注意:說(shuō)明書(shū)標(biāo)注的靈敏度(如<1.0 pg/mL)多基于標(biāo)準(zhǔn)品溶液,實(shí)際樣本因基質(zhì)干擾可能靈敏度下降。
加標(biāo)回收率測(cè)試(評(píng)估實(shí)際樣本中的靈敏度與準(zhǔn)確性)
操作:在已知GLUT1濃度的樣本(如血清、組織勻漿)中,加入已知量的標(biāo)準(zhǔn)品(如50 pg/mL),檢測(cè)回收濃度。
合格標(biāo)準(zhǔn):回收率在80%-120%之間。這是驗(yàn)證試劑盒在實(shí)際樣本中能否準(zhǔn)確檢測(cè)低濃度目標(biāo)的金標(biāo)準(zhǔn)。
稀釋線性實(shí)驗(yàn)(評(píng)估低濃度下的線性范圍與穩(wěn)定性)
操作:將高濃度樣本梯度稀釋(如1:2, 1:4, 1:8),檢測(cè)各稀釋度信號(hào)。
合格標(biāo)準(zhǔn):實(shí)測(cè)濃度與理論值偏差 ≤ 20%。這能證明試劑盒在低濃度區(qū)間仍能保持良好的線性關(guān)系,結(jié)果可靠。
二、關(guān)鍵考量點(diǎn)
匹配樣本濃度范圍:優(yōu)先關(guān)注定量限(LOQ),確保它低于你樣本中預(yù)期的GLUT1濃度。如果樣本濃度較高(ng/mL級(jí)),選擇pg/mL級(jí)別靈敏度的試劑盒反而可能導(dǎo)致信號(hào)飽和,需要大量稀釋,引入操作誤差。
關(guān)注批間差異:不同批次試劑盒性能可能有差異,建議新批次到貨后重新驗(yàn)證靈敏度。
結(jié)合其他參數(shù)綜合評(píng)估:靈敏度需與特異性(不與類似物交叉反應(yīng))、重復(fù)性(板內(nèi)/板間CV < 15%)等指標(biāo)結(jié)合,全面評(píng)估試劑盒性能。
三、快速驗(yàn)證建議
如果時(shí)間或資源有限,可優(yōu)行加標(biāo)回收率測(cè)試和稀釋線性實(shí)驗(yàn),兩者能快速評(píng)估試劑盒在實(shí)際樣本中的準(zhǔn)確性和線性范圍,是驗(yàn)證靈敏度是否足夠的補(bǔ)充。